1.背景技术
2.专利内容
3.发明意义
本发明提供了一株新菌株——约克氏菌 （Yokenella sp.）WZY002，及其在区域选择性还 原 α,β- 不饱和烯醛（酮）制备 α,β- 不饱和 烯醇和还原芳香醛（酮）制备芳香醇中的应用。 该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址 ： 中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号 ：CCTCC No:M2013099，保藏日期 ：2013 年 3 月 22 日。本发 明的有益效果主要体现在 ：提供了一株具有高区 域选择性、高立体选择性及高酶活力的新菌株，该 菌株催化 α,β- 不饱和烯醛（酮）的区域选择性 还原可得到多种 α,β- 不饱和烯醇，同时该菌株 也能催化芳香醛（酮）的还原得到芳香醇。本发明 菌株作为生物催化剂，区域选择性和立体选择性 高，催化活性强，所催化的反应不需要添加辅酶， 反应条件温和，在工业化生产上具有较高的应用 价值。
本发明提供了一种烯醇脱氢酶及其编码基 因，含有该编码基因的载体、工程菌及其应用。所 述烯醇脱氢酶的氨基酸序列如 SEQ ID No.1 所 示，其编码基因如 SEQ ID No.2 所示。本发明提 供了一种来源于约克氏菌 WZY002（Yokenella sp.WZY002）的烯醇脱氢酶基因核苷酸序列 ；该烯 醇脱氢酶基因可与表达载体连接构建得到含该基 因的胞内表达重组质粒，再转化至大肠杆菌菌株 中，获得重组大肠杆菌 ；该重组大肠杆菌经细胞 破碎，分离纯化获得重组烯醇脱氢酶 ；该重组烯 醇脱氢酶具有还原烯醛、烯酮、芳香醛和芳香酮等 底物生成对应的醇的能力 ；利用重组大肠杆菌或 重组烯醇脱氢酶为生物催化剂同时催化醇的氧化 和醛的还原，可以生成巴豆醛、苯甲醇、橙花醇和 香叶醇。
本发明公开了一种酶法不对称还原柠檬醛 提高(R )-香茅醛光学纯度的方法，即氨基酸催化 的柠檬醛顺反异构反应与酿酒酵母烯醇还原酶 OYE1催化的柠檬醛不对称氢化反应相偶联，提高 柠檬醛氢化产物(R )-香茅醛光学纯度的方法。所 述酿酒酵母烯醇还原酶OYE1催化柠檬醛顺反异 构体不对称氢化合成(R )-香茅醛时，其(R )-香茅 醛源自反式柠檬醛，而(S)-香茅醛源自于顺式柠 檬醛，并且对反式柠檬醛的催化速率要远高于顺 式柠檬醛。通过偶联氨基酸催化的柠檬醛顺反异 构反应，将部分顺式柠檬醛转化为反式柠檬醛， 显著地提高了产物(R )-香茅醛的e .e .值；在10mL 催化体系中，添加100mg/mL的甘氨酸，50mM柠檬 醛经4h的催化反应后，( R )-香茅醛的e .e .值达 65 .4％，与不偶联顺反异构化反应时(R )-香茅醛 的e .e .值(16 .7％ )相比，提高了48 .7％。
本发明公开了一种老黄酶NemRPS突变体及 其在制备 (S) 香茅醇中的应用，所述老黄酶 NemRPS突变体是将SEQ ID NO .2所示氨基酸序 列中第275位、第351位氨基酸进行单突变或双突变获得的。通过构建共表达老黄酶NemRPS突变 体、醇脱氢酶YsADH和葡萄糖脱氢酶BmGDHM6的基 因工程菌，以该基因工程菌作为催化剂，以恒速流加方式加入底物，一锅法多酶级联催化底物(E/Z)柠檬醛的二步还原，产物(S)香茅醇累积 浓度达500mM，产物e .e .值>99％，反应时间仅需12h，没有中间产物和副产物残留。
